Культивирование хламидий в куриных эмбрионах
Добавлено: Чт май 07, 2020 6:56 pm
Куриные эмбрионы имеют ряд преимуществ перед лаборатор-
ными животными:
1. Высокая чувствительность к широкому спектру вирусов (это
объясняется недостаточным развитием защитных механизмов, не об-
разуют антител в ответ на заражение).
2. Легкодоступный объект (большое количество птицефабрик и
инкубаториев).
3. Стерильность (так как скорлупа и подскорлупная оболочка
надежно защищают эмбрионы от бактериального заражения со сто-
роны внешней среды). Однако нельзя полностью исключить содер-
жание в них патогенных агентов (вирусного бронхита кур, гриппа,
лейкоза, ньюкаслской болезни и др.).
4. Экономичны (дешевы, не требуют ухода, кормления).
В вирусологии куриные эмбрионы используют:
1) для обнаружения в биологическом материале активного ви-
руса биопробой;
2) первичного выделения вируса и его культивирования;
3) поддержания вирусов в лаборатории в активном состоянии;
4) титрования вирусов;
5) накопления большой массы вирусов для лабораторных ис-
следований при производстве вакцин и диагностических тест-систем;
6) как тест-объект в реакции нейтрализации.
Эмбрионы доставляют из инкубатория, не допуская их охлажде-
ния в пути. В лаборатории эмбрионы инкубируют в термостате при
температуре 37° С и влажности 60-70 %, что достигается установле-
нием в термостате открытых широкогорлых сосудов с водой. Венти-
ляционные отверстия термостата должны быть открыты. Эмбрионы
размещают воздушной камерой вверх в специальных штативах. Ре-
комендуется до момента заражения дать возможность эмбрионам в
течение суток адаптироваться к новым условиям и нормализовать
свои функции после транспортного стресса. Если лаборатория распо-
лагает собственным инкубаторием, то снесенные курицей оплодотво-
ренные яйца пригодны для закладки в него в течение 10 дней.
Подготовка куриных эмбрионов к заражению включает овоско-
пирование и дезинфекцию скорлупы, а также соответствующую под-
готовку рабочего места. Овоскопирование представляет собой про-
смотр яиц против достаточно яркого источника света (овоскоп), в ре-
зультате чего на неосвещенной стороне скорлупы образуются тени от
внутренних структур
Заражение в желточный мешок.
Большей частью им пользуются для размно-
жения хламидий, а также вирусов болезни Марека,
ринопневмонии лошадей, катаральной лихорадки
овец и др. Заражают эмбрионы 5-7-дневного, а ино-
гда и 2-3-дневного возраста (вирус лихорадки до-
лины РИФ). Используют два варианта заражения.
Первый вариант. Эмбрионы помещают в штатив в вертикаль-
ном положении. Делают отверстие в скорлупе над центром воздуш-
ной камеры и вводят иглу на глубину 3,5-4 см под углом 45° к верти-
кальной оси в направлении, противоположном месту нахождения за-
родыша (рис. 7).
Второй вариант. Иногда аналогичный путь заражения осу-
ществляется на горизонтально укрепленном в штативе эмбрионе; при
этом зародыш находится внизу, а желток над ним. Отверстие в скор-
лупе закрывают каплей расплавленного парафина (см. рис. 4).
ными животными:
1. Высокая чувствительность к широкому спектру вирусов (это
объясняется недостаточным развитием защитных механизмов, не об-
разуют антител в ответ на заражение).
2. Легкодоступный объект (большое количество птицефабрик и
инкубаториев).
3. Стерильность (так как скорлупа и подскорлупная оболочка
надежно защищают эмбрионы от бактериального заражения со сто-
роны внешней среды). Однако нельзя полностью исключить содер-
жание в них патогенных агентов (вирусного бронхита кур, гриппа,
лейкоза, ньюкаслской болезни и др.).
4. Экономичны (дешевы, не требуют ухода, кормления).
В вирусологии куриные эмбрионы используют:
1) для обнаружения в биологическом материале активного ви-
руса биопробой;
2) первичного выделения вируса и его культивирования;
3) поддержания вирусов в лаборатории в активном состоянии;
4) титрования вирусов;
5) накопления большой массы вирусов для лабораторных ис-
следований при производстве вакцин и диагностических тест-систем;
6) как тест-объект в реакции нейтрализации.
Эмбрионы доставляют из инкубатория, не допуская их охлажде-
ния в пути. В лаборатории эмбрионы инкубируют в термостате при
температуре 37° С и влажности 60-70 %, что достигается установле-
нием в термостате открытых широкогорлых сосудов с водой. Венти-
ляционные отверстия термостата должны быть открыты. Эмбрионы
размещают воздушной камерой вверх в специальных штативах. Ре-
комендуется до момента заражения дать возможность эмбрионам в
течение суток адаптироваться к новым условиям и нормализовать
свои функции после транспортного стресса. Если лаборатория распо-
лагает собственным инкубаторием, то снесенные курицей оплодотво-
ренные яйца пригодны для закладки в него в течение 10 дней.
Подготовка куриных эмбрионов к заражению включает овоско-
пирование и дезинфекцию скорлупы, а также соответствующую под-
готовку рабочего места. Овоскопирование представляет собой про-
смотр яиц против достаточно яркого источника света (овоскоп), в ре-
зультате чего на неосвещенной стороне скорлупы образуются тени от
внутренних структур
Заражение в желточный мешок.
Большей частью им пользуются для размно-
жения хламидий, а также вирусов болезни Марека,
ринопневмонии лошадей, катаральной лихорадки
овец и др. Заражают эмбрионы 5-7-дневного, а ино-
гда и 2-3-дневного возраста (вирус лихорадки до-
лины РИФ). Используют два варианта заражения.
Первый вариант. Эмбрионы помещают в штатив в вертикаль-
ном положении. Делают отверстие в скорлупе над центром воздуш-
ной камеры и вводят иглу на глубину 3,5-4 см под углом 45° к верти-
кальной оси в направлении, противоположном месту нахождения за-
родыша (рис. 7).
Второй вариант. Иногда аналогичный путь заражения осу-
ществляется на горизонтально укрепленном в штативе эмбрионе; при
этом зародыш находится внизу, а желток над ним. Отверстие в скор-
лупе закрывают каплей расплавленного парафина (см. рис. 4).